亚洲综合一区国产精品

  • 400-626-9766 (025)5889-4959 Sales@DetaiBio.com
    聯系我們

    鼠單抗制備 兔單抗制備 雜交瘤測序 蛋白表達

    鼠單抗SingleB?快速發現服務

    從免疫到100株單抗 29天

    蛋白表達常用培養基及緩沖液配置

    蛋白表達常用培養基

    TB培養基配置

    Tryptone 7.2g,yeast 14.4g,甘油3g,磷酸氫二鉀9.86g,磷酸二氫鉀1.4g,去離子水攪拌溶解,定容至600ml(可分裝成兩瓶使用),其他量依次放大;

    資料下載

    LB液體培養基配置

    Tryptone 1g,yeast 6g,氯化鈉1g,去離子水溶解攪拌,定容至100ml;其他量依次放大;
    固體LB培養基,按照1.5%的量加入瓊脂

    2xYT培養基配置

    Tryptone 9.6g,yeast 6g,氯化鈉3g,去離子水攪拌溶解后定容至600ml;其他量依次放大;

    MD選擇培養基配置

    在80ml的去離子水中加入2g瓊脂糖,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L);

    MM選擇培養基配置

    在90ml的去離子水中加入2g瓊脂糖(20g/L),120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),0.5ml甲醇(0.5%);

    10xYNB配置

    134gYNB固體溶于1L的去離子水中,過濾滅菌,4℃保存;

    YPD完全培養基

    Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,葡萄糖20g/L,固體培養基添加1.5%的瓊脂;

    RDB轉化培養基配置

    山梨醇186g/L,瓊脂糖20g/L,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),10ml的10x葡萄糖(20g/L),0.2ml的500x生物素(4×10-4g/L),100xAA 1ml,攪拌混勻,倒平板(配置100ml滅菌時加入80ml水即可);

    100xAA (每種氨基酸0.5%)配置

    準確稱取L-谷氨酸,L-亮氨酸,L-異亮氨酸,L-賴氨酸,L-甲硫氨酸各500g溶于100ml去離子水中,過濾滅菌,4℃保存;

    BMGY誘導表達培養基配置

    Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氫二鉀3g/L,磷酸二氫鉀11.8g/L,加水至890ml,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甘油10ml;

    BMMY誘導表達培養基配置

    Tryptone 20g/L,yeast 10g/L,磷酸氫二鉀3g/L,磷酸二氫鉀11.8g/L,加水至895ml,120度滅菌20min,溫度下降60℃之后,超凈臺加入10ml 10xYNB(13.4g/L),1ml的500x生物素(4×10-4g/L),甲醇5ml;

    500x B(0.02%生物素)配置

    生物素20mg/100ml去離子水,過濾滅菌,4℃保存;

    10xBasal Salts發酵培養基配置

    NH4H2PO4 50g/L,CaSO4 0.93g/L,K2SO4 18.2g/L,MgSO4·7H2O 14.9g/L,KOH3g/L,葡萄糖50g/L,磷酸二氫鉀5g/L;

    上述培養基YNB,甲醇,生物素,氨基酸過濾除菌,葡萄糖108℃滅菌30min,其余120℃高壓滅菌20min;

    SDS-PAGE凝膠配置

    A液:丙烯酰胺29.2g,甲叉雙丙烯酰胺0.8g,去離子水攪拌溶解,定容至100ml;

    B液:Tris 18.2g,加800ml去離子水,調pH至8.8,加入4ml 10% SDS,定容至100ml;

    C液:Tris 6.05g,加30ml的去離子水,調pH至6.8,加入2ml 10% SDS,定容至50ml;

    D液:10% SDS

    AP:10%過硫酸銨:5g(0.5g)過硫酸銨,溶于50mL(5mL)去離子水中;現配現用或分裝至0.5mL離心管中冷凍備用。

    TEMED:TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,低溫保存。

    不同濃度的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠配置

    溶液成分不同體積的凝膠各成分的體積(ml)
    6 %510152025304050
    2.65.37.910.613.215.921.226.5
    30% A液123456810
    1.5mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.856.37.51012.5
    10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5
    10% AP0.050.10.150.20.250.30.40.5
    TEMED0.0040.0080.0120.0160.020.0240.0320.04
    12%
    1.63.34.96.68.29.913.216.5
    >30% A液2468101216>20
    1.5mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.856.37.51012.5
    10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5
    10% AP0.050.10.150.20.250.30.40.5
    TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02
    15 %
    1.12.33.44.65.76.99.211.5
    30% A液2.553.856.37.51012.5
    1.5mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.856.37.51012.5
    10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5
    10% AP0.050.10.150.20.250.30.40.5
    TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02

    瓊脂糖凝膠配置配置

    根據要分離的樣品(DNA)大小配制合適濃度的瓊脂糖凝膠。準確稱取一定量的瓊脂糖干粉,加入到合適體積的錐形瓶中,加入一定量的電泳緩沖液(30ml左右TAE);放入到微波爐內加熱融化,冷卻片刻(不燙手即可);融化后的瓊脂溶液搖晃混勻,倒入電泳槽中,等其凝固;室溫下凝固30-40min左右,小心的拔出梳子,取出凝固好的凝膠4℃保存;

    蛋白表達常用緩沖液

    SDS-PAGE電泳緩沖液配置

    配制1L,在1L燒杯中準確稱取Tris3.0g,甘氨酸14.4g,SDS1.0g,,去離子水攪拌溶解,定容至1L;

    Western blot轉膜緩沖液配置

    配制1L,在1L燒杯中準確稱取Tris5.8g,甘氨酸2.9g,SDS0.37g,甲醇200ml,加入去離子水攪拌溶解,定容至1L;

    SDS-PAGE上樣緩沖液配置

    ① 5xLoading buffer

    配制50ml,在1L的燒杯中,準確稱取Tris 0.9g,甘油32.5g,SDS 5g,DTT2.75g,溴酚藍0.125g,加入適量去離子水攪拌溶解,定容至50ml;

    ② 2xLoading buffer

    配制50ml,在1L的燒杯中,準確稱取60mM Tris 0.36g,20%甘油13g,4% SDS 2.0g,150mM DTT 1.10g,

    0.1%溴酚藍0.05g,加入適量去離子水攪拌溶解,定容至50ml;

    SDS-PAGE電泳染色液配置

    R250(1L):在合適體積的燒杯中,準確稱取R2501.0g,甲醇450ml,乙酸100ml,充分的溶解。

    SDS-PAGE電泳脫色液配置

    1L:冰乙酸100ml,甲醇100ml,充分混勻,室溫放置;

    1X PBS pH7.4配置

    500ml 1XPBS,在合適體積的燒杯中,準確稱取140mM氯化鈉4.1g,2.7mM氯化鉀0.1g,10mM NaH2PO4·12H2O 1.79g,1.8mM磷酸二氫鉀 0.122g,用480左右ml去離子水攪拌溶解,調pH為7.4,定容至500ml;

    1xTAE

    配置500ml1XTAE ,準備合適體積的燒杯,準確稱取Tris 2.42g,乙酸0.571ml,EDTA(Na)0.186g,加入去離子水攪拌溶解,定容至500ml;

     
    亚洲综合一区国产精品